饼干中抗氧化剂bht的测定
（本法参照gb/t5009·30-2003）
一、原理
试样通过水蒸气蒸馏，使bht分离，用甲醛吸收，遇邻联二茴香胺与亚硝酸钠溶液生成橙红色物质，用三氯甲烷提取，可进行比色定量。
二、试剂
1、无水氯化钙
2、甲醇
3、三氯甲烷
4、甲醇（50%）
5、亚硝酸钠溶液：3g/l，避光保存。
6、邻联二茴香胺溶液：称取125mg邻联二茴香胺于50ml棕色容量瓶中加25ml甲醇，振摇使其溶解，加50mg活性炭，振摇5min过滤，取20.0ml滤液置于另一50ml棕色容量瓶中，加盐酸（1+11）至刻度。临用时现配并避光保存。
7、bht标准溶液：准确称取0.050g bht，用少量甲醇溶解，移入100ml棕色容量瓶中，并稀释至刻度，避光保存。此溶液每毫升相当于0.050g bht。
8、bht标准使用液：临用时吸取1.0mlbht标准溶液，置于50ml棕色容量瓶中加甲醇至刻度，混匀，避光保存。此溶液每毫升相当于10.0 g bht。
三、仪器
1、水蒸气蒸馏装置。
2、甘油浴。
3、分光光度剂
四、测定步骤
1、试样处理
称取2~5g粉碎试样（约含0.40mgbht）于100ml蒸馏瓶中，加16.0g无水绿化钙粉末及10.0ml水，当甘油浴温度达到165℃恒温时，将蒸馏瓶浸入甘油浴中，连接好水蒸气发生装置，冷凝管下端浸入有50ml甲醇的200ml容量瓶中，进行蒸馏，蒸馏速度1.5~2ml/min，在50~60min内收集约100ml馏出液（连同原有的甲醇共约150ml，蒸汽压不可太高，以免油滴带出），以温热的甲醇分次洗涤冷凝管，洗液合并于容量瓶中并稀释至刻度。
2、测定
准确吸取25.0ml上述处理后的试样溶液，移入用黑纸（布）包扎的100ml分液漏斗中，另准确吸取0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mlbht标准使用液，分别置于用黑纸（布）包扎的60ml分液漏斗中，加入甲醇（50%）至25ml。分别加入5ml邻联二茴香胺溶液，混匀，再各加2ml亚硝酸钠溶液，振摇1min,放置10min，再加入10ml三氯甲烷，剧烈振摇1min,静置3min后，将三氯甲烷层移入用黑纸（布）包扎的10ml比色管中，管中预先放入2ml甲醇，混匀。用1cm比色皿以三氯甲烷为参比，于波长520nm处测定吸光度，制作标准曲线，比较定量。
五、 结果计算
式中：
x-试样中bht的含量，g/kg
m2-测定用样液中bht的质量，g
m1-试样质量，g
v1-蒸馏后样液总体积，ml
v2-测定用吸取样液的体积，ml