分光光度计|上海而立环保科技有限公司-开云体育买球app下载

 

单色器      切光器       吸收池    检测器

      图2-6 双波长分光光度计原理示意图

 

在含有多种吸光物质的溶液中，由于各吸光物质对某一波长的单色光均有吸收作用，如果各吸收物质的吸光质点之间相互不发生化学反应，当某一波长的单色光通过这样一种含有多种吸光物质的溶液时，溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之和。即

a_总=a₁+a₂+a₃+……+a_n

   图2-6，从光源发射出来的光线分成两束，分别经过两个单色器，得到两束波长不同的单色光。借助切光器，使这两道光束以一定的频率交替照到装有试液的吸收池，*后由检测器显示出试液对波长为λ₁和λ₂的光的吸光度差值δa。

设波长为λ₁和λ₂的两束单色光的强度相等，均为i₀，则分别得到下列关系式：

                                 -lg = a_λ1 =ε_λ1bc                       （2-13）

                               -lg = a_λ2=ε_λ2bc                         （2-14）

通过测定两光束经过吸收池后的光强度i₁及i₂，即可得到溶液对两波长的光的吸光度差δa：

                      -lg = a_λ2 - a_λ1 = δa=（ε_λ2-ε_λ1）bc                   （2-15）

可见δa与吸光物质浓度成正比。这是用双波长分光光度法进行定量分析的理论根据。

   如果测定的是浑浊溶液，在一般光度法中就必须用已知浊度的标准物质作参比，而实际上往往找不到合适的参比溶液。在双波长法中，两束单色光受到同一试液悬浮粒子的散射，所以对于浑浊试液实际测定的吸光度λ₁和λ₂应分别加上因散射而产生的吸光度d_λ1和d_λ2，即

                            a_λ1=ε_λ1bc+d_λ1 = +d_λ1                       （2-16）

                            a_λ2=ε_λ2bc+d_λ2 = +d_λ2                       （2-17）

可认为，测得的吸光度差δa就是待测组分的吸光度差，它与浑浊背景无关。应当注意：浑浊背景的吸光度差d_λ2 -d_λ1的大小与波长和λ₂、λ₁的差值大小有关。